細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期,細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低,對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
TUNEL凋亡檢測試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài),才可以進(jìn)行檢測。
細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界,既發(fā)生于生理狀態(tài)下,也發(fā)生于病理狀態(tài)下。細(xì)胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生(morphogenesis)、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和**反應(yīng)、**或中毒時(shí)引起的細(xì)胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用。
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期,PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35.8KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素FITC標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
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