DiBAC4(3)是一種細(xì)胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料，DIBAC4(3)本身無熒光，當(dāng)進(jìn)人細(xì)胞與胞漿內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合后才發(fā)出熒光，DIBAC4(3)進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度增加，即膜電位增加表示細(xì)胞去極化；反之，細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度降低即膜電位降低表示細(xì)胞超極化。DiBAC4(3)是目前*常用的線粒體膜鈣離子熒光探針Fluo4
A. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。
B. 刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時(shí)間（可4℃過夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
F. 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液，切勿弄反。
G. 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長在350nm左右，發(fā)射波長在460nm左右。
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