羥芪巴脒*DNA和RNA染料說明書

Cat#17514

羥芪巴脒*DNA和RNA染料

化學(xué)和物理特性

結(jié)構(gòu)式：

分子量：472.54

外觀：黃色粉末

溶劑：水或0.9% PBS

光譜特性：

激發(fā)=360nm，發(fā)射=625nm

生物應(yīng)用

Hydroxystilbamidine（也稱為Fluoro Gold）用于染色DNA和RNA。 它展出與RNA相比，當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí)，熒光發(fā)射譜具有明顯不同。 這種陽離子染料也經(jīng)常用作逆行神經(jīng)元示蹤劑。

染色樣品方案

Hydroxystilbamidine的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。 主要區(qū)別在于Fluoro-Gold在注射后存活時(shí)間，濃度范圍，組織**和與其他組織化學(xué)技術(shù)的兼容性方面更靈活。 它比大多數(shù)其他熒光示蹤劑更耐褪色，更亮和更持久。

操作方法

1.染料濃度：使用1至10％羥基芪脒。 起初，建議濃度為4％。 如果在注射部位不希望發(fā)生壞死，或標(biāo)記太強(qiáng)，則將濃度降低至2％溶液。

2.染料注入：

2.1壓力注入 - 這可能是常用的應(yīng)用模式。 注射的體積范圍為0.05-1μl，通常為0.1-0.2μl。

2.2晶體 - 示蹤劑的晶體可以從微量移液管的**施用。

3.固定：盡管可以使用任何固定劑或不使用固定劑，但常使用含有4％甲醛的PBS。含有高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會(huì)熄滅熒光，而高濃度（超過1％）的戊二醛可能會(huì)增加背景熒光。

4.組織處理：含有羥基芪脒的組織可以根據(jù)常見的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行處理。常使用固定組織的冷凍切片。

5.聯(lián)用技術(shù)在此處理時(shí)，可以進(jìn)一步處理切片用于**標(biāo)記，例如放射自顯影，HRP組織化學(xué)，**細(xì)胞化學(xué)，**熒光示蹤劑，熒光復(fù)染劑等。

6.切片安裝及處理：切片通常安裝在涂有明膠的載玻片上，空氣干燥，浸入二甲苯中，并用非熒光DPX塑料封固劑蓋上蓋玻片。 切片可以用分級(jí)醇脫水，除非這與**示蹤劑不相容。 如果將羥基噻嗪與熒光**細(xì)胞化學(xué)組合，則將切片風(fēng)干并直接用DPX蓋上蓋玻片。

7.檢查和攝影：羥基芪脒可以使用寬帶紫外激發(fā)濾光片（激發(fā) - 323nm，發(fā)射 - 中性pH為620nm）用熒光顯微鏡觀察。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出金色，而當(dāng)用酸性（例如PH3.3）pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出藍(lán)色。它可以用數(shù)碼機(jī)或膠片機(jī)拍攝（使用Ektachrome 200-400 ASA膠片進(jìn)行彩色打印，使用可比較的速度膠片進(jìn)行黑白打?。４蠖鄶?shù)曝光時(shí)間范圍為10-60秒曝光，具體取決于物鏡放大倍數(shù)和標(biāo)簽強(qiáng)度。三十（30）秒的暴露是平均的。可以利用多次暴露來同時(shí)顯現(xiàn)羥基雌二醇和另一種示蹤劑。因此，UV將與明場(chǎng)照明組合以同時(shí)在放射自顯影中定位具有HRP或銀顆粒的Fluoro-Gold。類似地，藍(lán)光激發(fā)可以組合以也可視化FITC的綠色發(fā)**色，而綠色激發(fā)光可以用于同時(shí)觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復(fù)染劑）的紅色發(fā)**色。

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