Cat#15204
DCFH-DA 活性氧ROS熒光探針
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訂購信息
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存儲條件
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貨號： 15204 (25 mg)
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保持在-20°C并干燥
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物理化學(xué)特性
分子量：487.29
溶劑：DMSO
光譜特性：激發(fā)=504，發(fā)射=529
生物應(yīng)用
2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯（也稱為2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯）被細(xì)胞酯酶水解成2'，7'-二氯二氫熒光素（也稱為2'，7'-二氯熒光素），然后被氧化成2。 '，7'-二氯熒光素主要由H2O2組成。 2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯可能在細(xì)胞內(nèi)氧化劑應(yīng)激期間對廣泛的氧化反應(yīng)具有反應(yīng)性。 該探針廣泛用于監(jiān)測細(xì)胞氧化還原過程。
染色細(xì)胞的樣本方案
以下過程提供了一般準(zhǔn)則，請根據(jù)您的特定應(yīng)用進(jìn)行修改
1. 制備1-10mM DMSO儲備溶液。應(yīng)將未使用的DMSO儲備溶液等分到單次使用的小瓶中避光并儲存在-20°C。
2. 在生理緩沖液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作濃度為1-10μM。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定工作濃度。
3. 從生長培養(yǎng)基中取出細(xì)胞，將染料工作溶液（來自步驟2）添加到細(xì)胞中，并在室溫或37 ℃下培養(yǎng)細(xì)胞5到60分鐘。
4. 去除染料工作溶液; 用預(yù)熱的HBSS洗滌，加入預(yù)熱的HBSS或生長培養(yǎng)基，在適宜溫度下培養(yǎng)。 恢復(fù)時間可以廣泛變化，因?yàn)橐恍┘?xì)胞類型通常表現(xiàn)出低水平的酯酶活性。
5. 在將細(xì)胞暴露于實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)物之前，確定負(fù)載細(xì)胞樣品的基線熒光強(qiáng)度。
6. 陰性對照如下：
6.1檢查未染色的細(xì)胞在綠色發(fā)射范圍內(nèi)的自發(fā)熒光。
6.2對于流式細(xì)胞術(shù)，確定在染料加載和處理后細(xì)胞的正向和側(cè)向散射不變。細(xì)胞尺寸的變化可能與處理或毒性反應(yīng)引起的起泡或收縮有關(guān)。
6.3在沒有誘導(dǎo)劑的情況下檢查染料和緩沖液/培養(yǎng)基的無細(xì)胞混合物的熒光。在沒有細(xì)胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，熒光隨時間的逐漸增加可能與自發(fā)水解，大氣氧化或光誘導(dǎo)的氧化。
6.4檢查已經(jīng)保持在生長培養(yǎng)基或簡單緩沖液中的未處理（對照）負(fù)載細(xì)胞的熒光。在健康細(xì)胞中，氧自由基被細(xì)胞酶或天然抗氧化劑消除。在染料加載恢復(fù)期后，健康細(xì)胞應(yīng)表現(xiàn)出低水平的熒光，在實(shí)驗(yàn)期間相對穩(wěn)定; 然而，可以觀察到熒光逐漸增加（由于自動氧化）或減少（由于細(xì)胞中的染料損失或光漂白）。 在沒有任何刺激或誘導(dǎo)的情況下，健康的未經(jīng)處理的細(xì)胞中的熒光突發(fā)可以指示細(xì)胞死亡或一些其他氧化事件的進(jìn)展。
7.可以用H 2 O 2或叔丁基過氧化氫（TBHP）刺激陽性對照至終濃度~100μM（基于細(xì)胞的敏感性和反應(yīng)增加或減少劑量）。
參考文獻(xiàn)
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