Cat#22844
Cell Meter?TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
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訂購信息
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儲(chǔ)存條件
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儀器平臺(tái)
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產(chǎn)品編號(hào)：22844（50種分析）
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保存在冰箱中并避免光照
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熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀和熒光酶標(biāo)儀
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產(chǎn)品介紹：
DNA片段化代表晚期細(xì)胞凋亡的特征。細(xì)胞凋亡中的DNA片段化可通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）檢測(cè)細(xì)胞。TUNEL試驗(yàn)依賴于DNA中缺口的存在，這可以通過TdT鑒定，TdT是一種酶催化添加用標(biāo)記二次標(biāo)記的dUTP。所有現(xiàn)有的TUNEL分析都包含高毒性的二甲胂酸鈉，它可能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還可以減少DNA的產(chǎn)生和DNA鏈。我們的Cell Meter?TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒使用不含二甲胂酸鈉的專有緩沖系統(tǒng)。該試劑盒基于Tunnelyte?Green的摻入，綠色熒光染料改性的脫氧尿苷5' - 在凋亡過程中形成的DNA片段的3'OH末端的三磷酸。該試驗(yàn)針對(duì)該試驗(yàn)進(jìn)行了優(yōu)化在不使用抗體的情況下直接檢測(cè)分離的或附著的細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡。該試劑盒提供所有必需組件和優(yōu)化的分析方案。它適合熒光酶標(biāo)儀，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀。可以使用FITC檢測(cè)其信號(hào)濾光片組或Ex / Em = 490nm / 520nm。
試劑盒套件：
分析方案：
簡要概述
1、用測(cè)試化合物制備細(xì)胞®
2、用4％甲醛固定細(xì)胞®
3、用反應(yīng)混合物培養(yǎng)
4、在37°C下培養(yǎng)1小時(shí)®
5、在Ex / Em = 490/520 nm處洗滌并分析細(xì)胞
操作步驟
1.根據(jù)您的特定方案將細(xì)胞培養(yǎng)至*佳密度以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 我們對(duì)于在96孔微孔板培養(yǎng)物中生長的粘附細(xì)胞，推薦約30,000至50,000個(gè)細(xì)胞/孔約1至2 x 106非粘附細(xì)胞的細(xì)胞/ mL。同時(shí)，對(duì)于每種標(biāo)記條件，用與誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)的陰性對(duì)照細(xì)胞群。注意：我們用100nM-1μM星形孢菌素處理HeLa細(xì)胞4小時(shí)以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
2.固定和透化
A,去除細(xì)胞培養(yǎng)基。
B,向每個(gè)孔中加入100μL/孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。
注意：對(duì)于非貼壁細(xì)胞，添加所需的量（例如2 x 106細(xì)胞/ mL）4％甲醛固定劑緩沖
C,在室溫下培養(yǎng)平板20至30分鐘。
D,去除固定劑。
可選：如果需要，在固定后加入100μL/孔/ 96孔板的透化試劑（0.2％Triton X-100在PBS中，未提供），并在室溫下培養(yǎng)10分鐘即 用PBS洗滌細(xì)胞2-3次。
可選：您也可以通過消化細(xì)胞使用DNAase I制備TUNEL反應(yīng)的陽性對(duì)照，用DNA酶I在室溫下保持30分鐘，然后進(jìn)行TUNEL反應(yīng)（步驟3）
3. TUNEL反應(yīng)
A,在使用前根據(jù)待測(cè)樣品的數(shù)量準(zhǔn)備反應(yīng)混合物：
注意：應(yīng)對(duì)每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，以確定*佳細(xì)胞密度。
B，向每個(gè)樣品中加入50μL反應(yīng)混合物（來自步驟3.1），并在37℃下培養(yǎng)60分鐘。
C，除去反應(yīng)混合物，用200μL/孔的PBS洗滌細(xì)胞3-5次。
4.通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或熒光微孔板監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度，讀數(shù)在Ex / Em = 490/520 nm。
5.可選：用1X Hoechst（組分C，Ex / Em = 350 / 460nm）染色細(xì)胞核用于圖像分析。
數(shù)據(jù)分析：
