谷胱甘肽(GSH),一種非典型的三肽化合物,幾乎存在于身體的每一個細胞中,它對人體的重要性就不言而喻了。快速檢測谷胱甘肽的試劑,百螢生物(Biolite)為您推薦AAT Bioquest經(jīng)過多年研發(fā),被各大科研機構(gòu)成熟運用的GSH/GSSG比率檢測試劑盒。
谷胱甘肽,是由三個氨基酸(半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸)組成的短肽,含有γ-酰胺鍵和巰基。它具有抗氧化作用和**作用,能夠幫助人體保持正常的**系統(tǒng)功能。它分為兩種形態(tài):還原型(G-SH);氧化型(G-S-S-G)。
(左:還原型谷胱甘肽,右:氧化型谷胱甘肽。圖片來源于網(wǎng)絡(luò))
在健康細胞中,超過90%的谷胱甘肽總量為還原型(GSH)。當(dāng)細胞暴露于增加的氧化應(yīng)激水平時,GSSG積累并且GSSG與GSH的比例增加。 GSSG-GSH比例增加是氧化應(yīng)激的指標(biāo)。監(jiān)測生物樣品中還原和氧化的GSH對于評估細胞/組織對氧化和自由基介導(dǎo)的細胞損傷的氧化還原和**狀態(tài)是必不可少的。
百螢生物(Biolite)出售的Amplite?熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率檢測試劑盒是一種超靈敏、可定量分析細胞樣品中GSH含量的試劑盒。該試劑盒使用專有的非熒光染料,與GSH反應(yīng)后變?yōu)閺姛晒?。使用一步熒光法,可?00μL測定體積(10 nM)中檢測少至1皮摩爾的GSH或GSSG。它可以在96孔或384孔微量滴定板下進行實驗,并且容易適應(yīng)自動化而無需分離步驟。信號可通過熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 520nm處輕松讀取。
Components
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Amount
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Component A: Thiolite? Green
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1 vial
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Component B: Assay Buffer
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1 bottle (25 mL)
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Component C: GSH Standard
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1 vial (62 mg)
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Component D: DMSO
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1 vial (200 mL)
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Component E: GSSG Probe
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1 bottle (lyophilized powder)
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Component F: GSSG Standard
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1 vial (124 mg)
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(表格為試劑盒各組分)
該試劑盒96孔檢測樣品數(shù)據(jù)分析
圖1.使用Gemini熒光酶標(biāo)儀(Molecular Devices),在具有Amplite TM熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定試劑盒的黑色96孔板中測量降低的GSH劑量反應(yīng)。 向每個孔中加入50μLGSH標(biāo)準(zhǔn)品(0.01至5μM)或空白對照,然后加入50μLGSHAssay Mixture。 孵育30分鐘后,在Ex / Em = 490 / 520nm處測量熒光強度。
圖2. 使用Gemini熒光酶標(biāo)儀(Molecular Devices),在黑色96孔板中用Amplite TM熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定試劑盒測量總GSH劑量反應(yīng)。 將50μLGSSG標(biāo)準(zhǔn)品(0.01至5μM),含GSH的樣品或空白對照加入每個孔中,然后加入50μL總GSH反應(yīng)混合物。 孵育30分鐘后,在Ex / Em = 490 / 520nm下測量熒光強度。
Panel A (GSH) Panel B (GSSG)
458.35
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458.35
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141
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634.993
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336
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257.558
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….
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….
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428.513
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428.513
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….
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….
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160.928
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281.123
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93.101
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151.857
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54.436
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96.522
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33.434
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53.277
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24.155
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34.407
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13.239
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12.505
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GSH校準(zhǔn)曲線如圖1所示:Log(y)= 2.1362 + 0.89694Log(x)(1)
總GSH校準(zhǔn)曲線如圖2所示:Log(y)= 2.1231 + 0.8166Log(x)(2)
谷胱甘肽檢測產(chǎn)品推薦
品牌
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貨號
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檢測
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儀器
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AAT
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5528
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僅標(biāo)記巰基
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酶標(biāo)儀
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AAT
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10060
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總巰基、GSH/GSSG
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AAT
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22810
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細胞內(nèi)GSH
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流式細胞儀、熒光顯微鏡
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