百螢生物為您推薦上等的鈣離子熒光探針之Cal-590

鈣檢測對于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要。熒光探針顯示結(jié)合鈣的光譜響應(yīng)，使研究人員能夠通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀，熒光光譜和熒光酶標(biāo)儀研究細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的變化。Rhod-2 AM*常用于紅色熒光鈣指示劑之一。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后僅在活細(xì)胞中發(fā)生中度熒光，并且具有非常小的細(xì)胞鈣反應(yīng)。

百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的鈣Cal-590?很好的改善了RHOD-2 AM細(xì)胞負(fù)載和鈣反應(yīng)，同時保持Rhod-2 AM的相似的光譜波長，使其與TRITC / Cy3^®濾波器組集合。在CHO和HEK細(xì)胞中，Cal-590 TM的細(xì)胞鈣反應(yīng)比Rhod-2 AM敏感得多。Cal-590?的光譜與fitc、alexa fluor®488和gfp的光譜很好地分離，使其成為一種理想的鈣離子探針，可與gfp細(xì)胞系或fitc/alexa fluor®488標(biāo)記抗體復(fù)合進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)分析。

圖1. Cal-590?在氯化鈣（5 mM）存在下的激發(fā)和發(fā)射光譜

圖2. Cal-590?在含有0至39μM游離Ca ²⁺溶液中的熒光發(fā)射光譜

圖3.在相同條件下用Cal-590 TM AM（紅色曲線，Cat＃20510）和Rhod-2，AM（藍(lán)色曲線）孵育的CHO-K1細(xì)胞中內(nèi)源性P2Y受體的ATP刺激的鈣響應(yīng)。將CHO-K1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中以每100μL/孔50,000個細(xì)胞的細(xì)胞密度接種過夜。向細(xì)胞中加入100μL的5μg/ mL Cal-590 TM AM或具有2.5mM丙磺舒的Rhod-2AM，并將細(xì)胞在37℃下孵育1小時。ATP（50μL/孔）通過FlexStation^®加入（Molecular Devices）中，以達(dá)到*終的指定濃度。

圖 4.CHO-K1細(xì)胞中內(nèi)源性P2Y受體對ATP的反應(yīng)。在Costar 96孔黑壁/透明底板中以每孔100μL40,000個細(xì)胞接種CHO-K1細(xì)胞過夜。100微升的4μM的校準(zhǔn)- 590?AM（貨號：20510）在HHBS用1mM丙磺舒加入到孔中，并且將細(xì)胞在37℃下溫育2小時。將染料上樣培養(yǎng)基替換為100μLHHBS和1mM丙磺舒，然后在添加50μL300μMATP之前和之后使用TRITC通道用熒光顯微鏡（Olympus IX71）成像。

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