在擴(kuò)增反應(yīng)的線性部分期間進(jìn)行PCR產(chǎn)物的測(cè)量，從而允許模板的準(zhǔn)確定量。幾種用于PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)定量的方法，包括使用熒光標(biāo)記的引物或分子信標(biāo)的熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)。還可以使用Cyber Green 監(jiān)測(cè)反應(yīng)期間PCR產(chǎn)物的鑒定。此外，通過(guò)在線毛細(xì)管PCR結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)，向反應(yīng)混合物中添加Cyber Green 染色，檢測(cè)出單個(gè)DNA分子.Cyber Green 優(yōu)先結(jié)合dsDNA，可以準(zhǔn)確定量雙鏈產(chǎn)物。單鏈寡核苷酸引物的存在。 Cyber Green 在PCR反應(yīng)所需的極端溫度下具有高穩(wěn)定性，不會(huì)干擾Taq聚合酶。通過(guò)在測(cè)定后使用Cyber Green 測(cè)量產(chǎn)物的熔融溫度，可以實(shí)現(xiàn)定量所需產(chǎn)物的改進(jìn)的特異性。沒(méi)有堿基錯(cuò)配的雙鏈DNA將顯示比含有錯(cuò)配的非特異性模板更高的解鏈溫度。實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)可以通過(guò)使用專用于該應(yīng)用的儀器或通過(guò)在不同時(shí)間點(diǎn)手動(dòng)量化擴(kuò)增產(chǎn)物來(lái)進(jìn)行。
使用Cyber Green 的實(shí)時(shí)定量PCR用于基因突變的可靠且簡(jiǎn)單的測(cè)定，包括蚊子抗藥性基因的重復(fù)和缺失，人類**基因中的染色體易位和堿基替換。它還被用于鑒定病毒，**或**病原體。此外，該方法已成功用于定量逆轉(zhuǎn)錄PCR。
圖1.使用Cyber Green （Cat＃17591）對(duì)KIR基因（殺傷細(xì)胞**球蛋白樣受體）的10倍系列稀釋液（3×10 5至3個(gè)copies）進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR的擴(kuò)增曲線。
相關(guān)產(chǎn)品訂購(gòu)信息
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貨號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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價(jià)格
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17004
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氨基烯丙基-DUTP鈉鹽 4mM AA-dUTP
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1 umole
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1140
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17021
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氨烯丙基UTP鈉溶液 4mM AA-UTP
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250 uL
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3540
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17016
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1mM Biotin-11-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17017
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1mM Biotin-16-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17018
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1mM Biotin-20-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17591
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Cyber Green 20X水溶液PCR定量
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5x1 ml
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2340
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17590
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Cyber Green 核酸凝膠染料 10000X DMSO
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1ml
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5940
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17024
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1mM DEAC-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17022
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1mM Fluorescein-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17011
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1mM mFluor dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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395
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6-ROX甘氨酸 25 uM熒光法PCR檢測(cè)參照液
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5ml
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2340
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17023
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1mM Tetramethylrhodamine-dUTP溶液
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25 nmoles
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1140
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17006
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1mM TF1-dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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17007
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1mM TF2-dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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17008
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1mM TF3-dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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17009
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1mM TF4-dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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17010
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1mM TF5-dUTP溶液
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25 nmoles
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3540
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