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ReadiLink 快速抗體標(biāo)記試劑盒推薦操作步驟（標(biāo)記50μg蛋白）：
將所有組分加熱并在打開前將樣品瓶短暫離心，并在開始結(jié)合前立即準(zhǔn)備所需的溶液。 以下SOP是標(biāo)記抗HDAC IgG抗體的實例。
1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液（溶液A）：
為了標(biāo)記50g蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL），將5L（總反應(yīng)體積的10％）的反應(yīng)緩沖液（組分B）與50L目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。
注1.如果您的蛋白質(zhì)濃度不同，請相應(yīng)調(diào)整蛋白質(zhì)體積，使~50μg蛋白質(zhì)可用于標(biāo)記反應(yīng)。
注2.為了標(biāo)記100g蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL），將10μL（總反應(yīng)體積的10％）反應(yīng)緩沖液（組分B）與100μL目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。
注3.蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中;如果蛋白質(zhì)溶解在甘氨酸緩沖液中，必須用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（來自Millipore的cat＃UFC501008）去除用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（如硫酸銨和乙酸銨）。
注4.不純抗體、牛血清白蛋白（BSA）或明膠穩(wěn)定的抗體不會被很好地標(biāo)記。
注5.如果蛋白質(zhì)濃度小于1 mg / mL，則結(jié)合效率明顯降低。為獲得*佳標(biāo)記效率，建議*終蛋白質(zhì)濃度范圍為1-2 mg / mL。
2.運行結(jié)合反應(yīng)：
2.1 將蛋白質(zhì)溶液（溶液A）加入一瓶標(biāo)記染料（組分A）中，通過反復(fù)移液幾次將其混合均勻，或?qū)⑿∑繙u旋幾秒鐘。
注意：使用標(biāo)記染料的兩個小瓶（組分A）通過將100μg蛋白質(zhì)分成2x50μg蛋白質(zhì)并使每個50μg蛋白質(zhì)與一小瓶標(biāo)記染料反應(yīng)來標(biāo)記100μg蛋白質(zhì)。 將兩個小瓶合并用于下一步。
2.2 將綴合反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。
注意：如果需要，可以旋轉(zhuǎn)或搖動綴合反應(yīng)混合物更長的時間。
3.停止共軛反應(yīng)：
3.1 添加5 L（對于50μg蛋白質(zhì)）或10L（對于100μg蛋白質(zhì)），其為TQ染色猝滅緩沖液（組分C）的總反應(yīng)體積的10％到綴合反應(yīng)混合物中（來自步驟2.2），將它們混合均勻。
3.2 在室溫下孵育10分鐘。
3.3 標(biāo)記的蛋白質(zhì)（抗體）完成。
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