今天，百螢為大家?guī)淼氖怯糜诩毎徒M織中低豐度靶標(biāo)的高分辨率成像技術(shù)。TSA/PSA是一種成熟的細胞信號放大技術(shù)，當(dāng)TSA/PSA與我們光穩(wěn)定性、水溶性**的iFluor染料結(jié)合后，產(chǎn)生的熒光信號具有比傳統(tǒng)**組織化學(xué)、**細胞化學(xué)和**熒光方法產(chǎn)生的信號更高的**度和靈敏度。PSA是美國AAT Bioquest自主研發(fā)的與TSA功能類似的信號放大方法，其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來看看吧！
限時促銷預(yù)告：所有包含細胞信號放大的TSA酪胺試劑均七折出售；活動時間，2020.7.1-2020.7.31；活動**終端用戶。
TSA/PSA原理
酪胺信號放大（TSA）是一種基于辣根過氧化酶（HRP）的催化活性對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)（已標(biāo)記熒光的酪胺在HRP催化H?O?下形成共價鍵結(jié)合位點）產(chǎn)生的大量酶促產(chǎn)物與目標(biāo)蛋白的酪氨酸殘基共價結(jié)合，從而使目標(biāo)蛋白標(biāo)記上特異的熒光或生物素。
圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過類似于傳統(tǒng)ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA試劑可以通過幾個簡單的步驟實現(xiàn)對所需目標(biāo)的靈敏檢測。
表1.TSA/PSA技術(shù)與傳統(tǒng)**熒光對比
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TSA/PSA多標(biāo)**熒光
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傳統(tǒng)**熒光
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靶點數(shù)目
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不受限制（*多可同時染色7-10種）
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一般標(biāo)記3種（含DAPI）,>3種標(biāo)記難度較大
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一抗種類
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同一種屬的不同抗體即可滿足要求
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不同種屬的不同抗體
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二抗種類
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連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗
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連接熒光探針的不同種屬二抗
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染色策略
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任何樣本無需任何染色策略，簡單的重復(fù)前一步的染色過程，樣本/靶點的差異不影響染色過程，使用簡單方便
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樣本抗原的空間位置的差異，需要設(shè)計復(fù)雜的染色策略。樣本/靶點的差異導(dǎo)致染色策略的差異，染色過程復(fù)雜、多變
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染色效果
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高染色分辨率和染色特異性，信號強度更強,更穩(wěn)定,淬滅時間更長，無背景影響，各靶點的信噪比大大提高，尤其適合組織基于單細胞的定量分析
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亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響，背景較高，對基于單細胞的定量分析不利。
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實驗成本
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同一種屬的一抗和二抗，價格相對便宜。
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簡單的染色策略和無需任何重復(fù)的預(yù)實驗，即可掌握整個染色技術(shù)，大大縮小了預(yù)實驗的材料損耗。
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一抗和二抗工作濃度更低,單次費用更低
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不同種屬的抗體價格存在差異，一般種屬**的價格高。
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不同種屬的二抗，價格存在差異，一般**的種屬價格高。
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尋找合適的染色策略，復(fù)雜的多次重復(fù)的預(yù)實驗大大的增加了實驗成本
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應(yīng)用范圍
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二抗具備通用性，因此實驗室中所有的研究領(lǐng)域均可使用
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二抗不具備通用性，實驗室中應(yīng)用領(lǐng)域受到局限
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TSA/PSA特點
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TSA
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PSA
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1.適用廣，多色標(biāo)記
2.多重標(biāo)記可避免抗體種屬交叉問題
3.染色特異性好，信號強度高，適合低豐度靶標(biāo)
4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈
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1.檢測靈敏度提高了100多倍，比標(biāo)準(zhǔn)IHC，ICC，IF方法高出100倍
2.改進的熒光信號比酪胺（TSA）試劑高10至50倍
3.PSA 自由基的更高反應(yīng)性允許在HRP-靶相互作用位點更快速，有效和更穩(wěn)定地標(biāo)記Styramide綴合物。
4.在不犧牲靈敏度的情況下，PSA可以使用更少量的抗體/探針
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實驗結(jié)果展示
圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用polyHRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育，*后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。
圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
圖4.Styramide 超級信號放大試劑盒的信號強度對比。 （A）將HeLa細胞固定，透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標(biāo)記，建議的稀釋濃度為：1：500。 然后將細胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色，*后分別與HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像，并以相同的曝光時間進行分析。 （B）測量相對熒光信號強度，并比較不同檢測方法之間的強度。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
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分類
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貨號
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產(chǎn)品名稱
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Ex(nm)
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Em(nm)
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TSA試劑
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45100
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iFluor 488 酪胺
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491
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514
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45105
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iFluor 555 酪胺
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552
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567
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45110
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iFluor 647 酪胺
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649
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665
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11070
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AF488 酪胺
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491
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518
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11075
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AF546 酪胺
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554
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570
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11082
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AF594 酪胺
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590
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617
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11065
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Cy3 酪胺
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555
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565
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11066
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Cy5 酪胺
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644
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665
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11061
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Azido-Cy5酪胺
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644
|
665
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PSA試劑
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45000
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iFluor 350 Styramide
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345
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442
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45020
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iFluor 488 Styramide
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491
|
514
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45025
|
iFluor 546 Styramide
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541
|
557
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45027
|
iFluor 555 Styramide
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552
|
567
|
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45030
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iFluor 568 Styramide
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568
|
587
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45035
|
iFluor 594 Styramide
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592
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619
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45045
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iFluor 647 Styramide
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649
|
665
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45050
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iFluor 680 Styramide
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676
|
695
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45055
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iFluor 700 Styramide
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685
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710
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45065
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iFluor 750 Styramide
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749
|
775
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45070
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iFluor 790 Styramide
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782
|
811
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試劑盒
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45200
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iFluor 350 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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345
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442
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45205
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iFluor 488 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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491
|
514
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45220
|
iFluor 555 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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552
|
567
|
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45230
|
iFluor 594 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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592
|
619
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45240
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iFluor 647 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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649
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665
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