本周，百螢生物為大家推薦的是AAT Bioquest研發(fā)生產(chǎn)的caspase系列產(chǎn)品。半胱天冬酶（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶或半胱氨酸依賴性天冬氨酸定向蛋白酶）是一類蛋白酶，其功能與細(xì)胞凋亡（程序性細(xì)胞死亡），壞死和發(fā)燒（炎癥）密切相關(guān)。它是胞質(zhì)天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白酶，其充當(dāng)細(xì)胞凋亡的主要介質(zhì)。各種受體，例如TNF-α 受體，F(xiàn)asL受體，TLR和死亡受體，以及Bcl-2和凋亡抑制劑（IAP）蛋白家族參與并調(diào)節(jié)該caspase依賴性凋亡途徑。一旦被上游（外部或內(nèi)部）刺激激活，胱天蛋白酶執(zhí)行下游蛋白質(zhì)底物的蛋白水解，引發(fā)一系列事件，導(dǎo)致細(xì)胞分解，死亡，吞噬作用和細(xì)胞碎片的**。AAT Bioquest提供了大量用于實時酶動力學(xué)和終點測定形式測量胱天蛋白酶活性的試劑和試劑盒。
半胱天冬酶底物和抑制劑
Caspase底物和抑制劑由兩個關(guān)鍵成分組成：Caspase識別序列和信號產(chǎn)生或蛋白酶抑制基序。半胱天冬酶識別序列由對所測量的半胱天冬酶或半胱天冬酶特異的三個或四個氨基酸標(biāo)記（表2）。半胱天冬酶識別序列的N端通常用乙?；ˋc）或碳苯甲氧基（Z）基團(tuán)修飾，以增強(qiáng)膜的通透性。預(yù)期的半胱天冬酶將特定的肽序列識別為其酶促切割位點，釋放信號產(chǎn)生或抑制基序。發(fā)光和熒光半胱天冬酶底物均以相似的方式操作，其中信號或顏色強(qiáng)度與蛋白水解活性成比例。
表1. Caspase底物和抑制劑的caspase活性肽識別序列
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肽類
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氨基酸序列
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胱天蛋白酶的目標(biāo)
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IETD
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Ile-Glu-Thr-Asp
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半胱天冬酶8，顆粒酶B
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DEVD
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Asp-Glu-Val-Asp
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半胱天冬酶3、6、7、8或10
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LEHD
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Leu-Glu-His-Asp
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半胱天冬酶9
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VAD
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Val-Ala-Asp
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半胱天冬酶1、2、3、6、8、9或10
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表2. Caspase顯色底物：半胱天冬酶顯色底物包含信號產(chǎn)生基序，例如與半胱天冬酶識別序列連接的高度著色的生色團(tuán)pNA（對硝基苯胺或4-硝基苯胺）。使用光吸收酶標(biāo)儀或分光光度計在405 nm處進(jìn)行比色監(jiān)測。
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基質(zhì)
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CAS號
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胱天蛋白酶的目標(biāo)
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Ac-DEVD-pNA
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189950-66-1
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半胱天冬酶3
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Z-DEVD-pNA
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--
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Z-IETD-pNA
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219138-21-3
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半胱天冬酶8，顆粒酶B
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表3. 熒光Caspase底物：熒光半胱天冬酶底物的結(jié)構(gòu)包含與半胱天冬酶識別相關(guān)的熒光團(tuán)，例如7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC），羅丹明110（R110）或ProRed 620序列。基于R110的半胱天冬酶底物比基于香豆素的半胱天冬酶底物（例如AMC和AFC）更敏感，但由于兩步裂解過程，其動態(tài)范圍更窄。建議將基于R110的caspase底物用于終點測定，而將AMC和AFC caspase底物用于動力學(xué)測定。
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基質(zhì)
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CAS號
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Ex / Em（nm）
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胱天蛋白酶的目標(biāo)
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Ac-DEVD-AFC
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201608-14-2
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376/480
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半胱天冬酶3、7
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Ac-DEVD-AMC
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169332-61-0
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339/439
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Z-DEVD-AFC
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--
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376/480
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Z-DEVD-AMC
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1135416-11-3
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339/439
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Z-DEVD-ProRed 620
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--
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530/619
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(Z-DEVD)2-R110
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223538-61-2
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499/521
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Z-DEVD-ProRed 620
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--
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530/619
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Ac-IETD-AFC
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211990-57-7
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376/480
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半胱天冬酶8，顆粒酶B
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Ac-IETD-AMC
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348079-17-4
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339/439
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Z-IETD-AFC
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219138-02-0
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376/480
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（Ac-IETD）2-R110
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--
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499/521
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Z-IETD-ProRed 620
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--
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530/619
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AC-LEHD-AMC
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292633-16-0
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339/439
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半胱天冬酶9
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（Ac-LEHD）2-R110
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--
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499/521
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Z-LEHD_ProRed 620
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--
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530/619
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表4. 可逆和不可逆結(jié)合的半胱天冬酶抑制劑：半胱天冬酶抑制劑與半胱天冬酶的活性位點結(jié)合并形成可逆或不可逆的連接。通常，半胱天冬酶抑制劑的結(jié)構(gòu)由半胱天冬酶識別序列和諸如醛（-CHO）或氟甲基酮（-FMK）的官能團(tuán)組成。具有醛官能團(tuán)的胱天蛋白酶抑制劑是可逆的，而具有FMK的抑制劑是不可逆的。半胱天冬酶底物和抑制劑都具有*小的細(xì)胞毒性作用，因此，在研究半胱天冬酶活性時是有用的工具。
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抑制劑
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CAS號
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Ex / Em（nm）
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可逆性
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胱天蛋白酶的目標(biāo)
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Ac-DEVD-CHO
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169332-60-9
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--
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可逆的
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半胱天冬酶3、7
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FITC-C6-DEVD-FMK
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--
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489/515
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不可逆的
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Ac-IETD-CHO
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191338-86-0
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--
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可逆的
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半胱天冬酶8
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FITC-C6-LEHD-FMK
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--
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489/515
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不可逆的
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半胱天冬酶9
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mFluor 450-VAD-FMK
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--
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405/444
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不可逆的
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半胱天冬酶1，2，3，6，8，8，10
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mFluor 510-VAD-FMK
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--
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408/503
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FAM-VAD-FMK
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--
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492/516
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SRB-VAD-FMK(Sulforhodamine B-VAD-FMK)
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--
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557/576
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Tide Fluor 4-VAD-FMK
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--
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577/601
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半胱天冬酶檢測試劑盒
表5. 半胱天冬酶3、7、8和9活性檢測試劑盒：Cell Meter 半胱天冬酶活性測定試劑盒提供了一種強(qiáng)大而便捷的方法來測量活細(xì)胞中的半胱天冬酶活性。這些檢測法利用含有識別位點的可滲透細(xì)胞的底物來檢測Caspase3和7，Caspase8或Caspase9的活性，以及用于同時檢測所有Caspase的多重測定。半胱天冬酶識別序列的綴合抑制了熒光團(tuán)或生色團(tuán)產(chǎn)生可量化信號的能力。在合適活化的半胱天冬酶的存在下，將熒光團(tuán)或發(fā)色團(tuán)從識別序列上切割下來，并自由地產(chǎn)生檢測細(xì)胞凋亡的明亮的熒光或顏色信號。
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產(chǎn)品名稱
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Ex / Em（nm）
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樣品類型
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平臺
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Cell Meter Caspase3/7活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*藍(lán)色熒光*
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350/450
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活細(xì)胞
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微孔板和HCS
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Cell Meter Caspase3/7活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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Cell Meter Caspase3/7活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*紅色熒光*
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540/620
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Cell Meter Caspase3/7活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*針對流式細(xì)胞儀優(yōu)化的綠色熒光*
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488/530
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流式細(xì)胞儀
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Cell Meter Caspase 8活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*藍(lán)色熒光*
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370/450
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活細(xì)胞
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微孔板和HCS
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Cell Meter Caspase 8活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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Cell Meter Caspase8活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*紅色熒光*
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540/620
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Cell Meter Caspase9活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*藍(lán)色熒光*
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375/435
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活細(xì)胞
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微孔板和HCS
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Cell Meter Caspase9活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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Cell Meter Caspase9活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒*紅色熒光*
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540/620
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Cell Meter Caspase3 / 7、8和9活細(xì)胞復(fù)用檢測試劑盒*三重?zé)晒馍?
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三重?zé)晒?
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活細(xì)胞
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微孔板和HCS
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表6. 基于溶液的半胱天冬酶3和7活性檢測試劑盒。
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產(chǎn)品名稱
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Ex / Em（nm）
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樣品類型
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平臺
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Amplite 比色Caspase3/7活性檢測試劑盒*黃色熒光*
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490 /無
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細(xì)胞提取物
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光吸收酶標(biāo)儀
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Amplite 熒光Caspase3/7活性檢測試劑盒*藍(lán)色熒光*
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350/450
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熒光酶標(biāo)儀
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Amplite 熒光Caspase3/7活性檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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Amplite 熒光Caspase3/7檢測檢測試劑盒*紅色熒光*
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535/620
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表7. 半胱天冬酶1、2、3 / 7、6、8、9、10和13結(jié)合檢測試劑盒。
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產(chǎn)品名稱
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Ex / Em（nm）
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濾波片組
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規(guī)格
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase1結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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FITC濾波片組
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25Tests
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase2結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase3/7結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase3/7結(jié)合檢測試劑盒*紅色熒光*
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550/595
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TRITC濾波片組
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25Tests
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase6結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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490/525
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FITC濾波片組
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25Tests
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase8結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase9結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase10結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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Cell Meter 活細(xì)胞Caspase13結(jié)合檢測試劑盒*綠色熒光*
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