基本信息
貨號：21411（25mg）
儲存條件：-20℃避光防潮
簡介
DiBAC4（3），DiBAC4（5）和DiSBAC2（3）是一組靈敏的慢響應(yīng)膜電位探針，廣泛用于測量許多生物系統(tǒng)的膜電位。 通常，慢反應(yīng)探針在其跨膜分布中表現(xiàn)出潛在的依賴性變化，伴隨著大的熒光變化。 它們的光學(xué)響應(yīng)的幅度遠(yuǎn)大于快速響應(yīng)探針的幅度（通常每mV的熒光變化為1％）。 包括陽離子羰花青，羅丹明和陰離子氧雜菁的慢反應(yīng)探針適用于檢測由呼吸活性，離子通道滲透性，**結(jié)合和其他因素引起的非興奮細(xì)胞的平均膜電位的變化。
物理化學(xué)特性
分子量：516.64
儲存方式：DMSO
Ex=493nm
Em=516nm
染色細(xì)胞分析方案
簡要概括
在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞®
添加染料加載溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®
在室溫或37 oC孵育30分鐘至1小時(shí)®
讀取熒光強(qiáng)度
在Ex / Em = 490 / 525nm（Cat。＃21411），590 / 632nm（Cat。＃21410）或540/590nm（Cat。＃21414）
注意：以下是我們推薦的活細(xì)胞方案。 它只提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。
操作步驟
1.準(zhǔn)備細(xì)胞：
1.1對于貼壁細(xì)胞：在生長培養(yǎng)基中以40,000至80,000個(gè)細(xì)胞/孔/100μL將細(xì)胞過夜用于96孔板或10,000至20,000個(gè)細(xì)胞/孔/25μL用于384孔板。
1.2對于非粘附細(xì)胞：從培養(yǎng)基中離心細(xì)胞，然后將細(xì)胞沉淀懸浮于等量的HHBS和MP染料加載溶液中（參見下面的步驟2.2），125,000至250,000細(xì)胞/孔/100μL，96- 對于384孔聚D賴氨酸板，聚d-D賴氨酸板或30,000至60,000細(xì)胞/孔/25μL。在實(shí)驗(yàn)之前以制動器關(guān)閉以800rpm離心板2分鐘。
注意：應(yīng)對每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評估，以確定細(xì)胞內(nèi)鈣動員的細(xì)胞密度。
2.準(zhǔn)備DiSBAC2（3）染料加載溶液（1個(gè)板）：
2.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備10至30 mM的DiSBAC2（3）儲備液。 應(yīng)及時(shí)使用原液; 需要將任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷凍。
注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。
2.2制備2X DiSBAC2（3）染料加載溶液：在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將DiSBAC2（3）固體溶解在DMSO中或?qū)⒌确莸?/span>DiSBAC2（3）儲備溶液解凍至室溫。制備2X工作溶液 在Hanks和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液中，20至40μM，pH值為7，含有0.04％至0.08％Pluronic®F-127（Cat。＃20053）和2 mM Trypan Red Plus?（Cat。 ＃2456）。 通過votexing很好地混合它們。 該工作溶液在室溫下穩(wěn)定至少2小時(shí)。
3.運(yùn)行膜電位測定：
3.1將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）DiSBAC2（3）染料加載溶液（來自步驟2.2）加入細(xì)胞板中。
注意1：如果您的篩選化合物干擾生長培養(yǎng)基和血清因子，在添加DiSBAC2（3）染料加載溶液之前，用等體積的HHBS緩沖液替換生長培養(yǎng)基?；蛘?，細(xì)胞可以在無血清條件下生長。
注2：染料加載后不要洗滌細(xì)胞。
3.2將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。
注意：在某些情況下，在室溫下孵育30至60分鐘可能會更好。
3.3使用HHBS或所需緩沖液制備復(fù)合板。
3.4通過監(jiān)測Ex / Em = 540 / 590nm處的熒光強(qiáng)度（Cat。＃21414）進(jìn)行膜電位測定。
注意：在實(shí)驗(yàn)之前運(yùn)行信號測試很重要。不同的樂器有自己的強(qiáng)度范圍。將信號測試強(qiáng)度調(diào)整到儀器強(qiáng)度計(jì)數(shù)的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的*大熒光強(qiáng)度計(jì)數(shù)為65,000，因此應(yīng)調(diào)整儀器設(shè)置以使其信號測試強(qiáng)度在7,000到10,000左右。
數(shù)據(jù)分析
圖1.在WSS-1細(xì)胞中用DiSBAC2（3）測量GABA劑量反應(yīng)。 將WSS-1細(xì)胞以50,000個(gè)細(xì)胞/100μL/孔接種過夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 將細(xì)胞與100μLDiSBAC2（3）染料上樣溶液在室溫下孵育30分鐘。 通過FlexStation（Molecular Devices）添加GABA（50μL/孔）以達(dá)到*終指示的濃度。