D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。D蟲熒光素鉀鹽目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質(zhì)性的差別。
D-Luciferin作為熒光素酶的底物,存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,熒光素被氧化,產(chǎn)生藍綠色的光(560nm),當?shù)孜镞^量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、**、哺乳動物細胞的常見報告基因。由于沒有背景干擾,因此可以很容易檢測出低至0.02 pg水平的熒光素酶。廣泛應用與活體成像報告基因檢測等領(lǐng)域。
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