鬼筆環(huán)肽是鬼筆**家族的主要代表，是一種雙環(huán)七肽，是從有毒的死亡帽蘑菇傘形毒蕈中分離出來(lái)的。它對(duì)F-肌動(dòng)蛋白亞基之間的凹槽具有很高的親和力。一旦與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合，鬼筆環(huán)肽就會(huì)使單體和長(zhǎng)絲的平衡向長(zhǎng)絲位置移動(dòng)，并抑制ATP水解。相互作用通過(guò)防止亞基解離來(lái)穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲，并通過(guò)降低臨界濃度促進(jìn)肌動(dòng)蛋白聚合。結(jié)果，這些特性使得鬼筆環(huán)肽衍生物成為可視化F-肌動(dòng)蛋白和細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的有用染色劑。本周百螢主要想帶大家了解一下關(guān)于鬼筆環(huán)肽、肌動(dòng)蛋白以及染色過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。
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1.我可以用戊二醛固定細(xì)胞，然后用熒光鬼筆環(huán)肽染色嗎？
可以使用戊二醛固定細(xì)胞。請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件選擇固定方法。用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定細(xì)胞后，用鬼筆環(huán)肽綴合物（例如鬼筆環(huán)肽-iFluor 488）染色效果較佳。
圖示:用鬼筆環(huán)肽-iFluor 綴合物標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲。F-肌動(dòng)蛋白，細(xì)胞核和溶酶體分別用（A）Phalloidin iFluor 488（#23115），Nuclear blue DCS1（#17548）和LysoBrite Red（#22645）染色，（B） Phalloidin-iFluor 700（#23129）和Nuclear Blue DCS1（C）Phalloidin-iFluor 350（#23110）和Nuclear Orange DCS1（#17551）。
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2.在用鬼筆環(huán)肽染料綴合物對(duì)肌動(dòng)蛋白染色之前，應(yīng)如何固定樣品？
避免使用含甲醇的固定劑，因?yàn)樗鼤?huì)在固定過(guò)程中會(huì)破壞肌動(dòng)蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
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3.在用鬼筆環(huán)肽-iFluor 綴合物對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色之前，我需要對(duì)石蠟包埋的組織切片進(jìn)行脫石蠟處理嗎？您可以提供脫石蠟方案嗎？
是的，使用任何熒光鬼筆環(huán)肽綴合物對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色，都必須將石蠟包埋的組織切片去石蠟（去除石蠟）。
去除組織切片的石蠟：
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將切片加熱到57°C持續(xù)5分鐘。
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將切片浸入2次二甲苯中，每次5分鐘。
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將切片分別浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分鐘。
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用1X PBS洗滌2次，每次5分鐘。
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進(jìn)行F-肌動(dòng)蛋白標(biāo)記。
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4.甲醛和多聚甲醛在細(xì)胞固定方面有什么區(qū)別？
多聚甲醛（PFA） 是甲醛的聚合物。多聚甲醛本身不是固定劑，需要溶解成甲醛?？梢酝ㄟ^(guò)加熱或在堿性條件下溶解得到甲醛。
福爾馬林 是飽和（37％）甲醛溶液的名稱(chēng)。但是請(qǐng)注意，某些商業(yè)甲醛溶液中含有甲醇以防止聚合（轉(zhuǎn)化為多聚甲醛）。由于100％福爾馬林含有高達(dá)15％的甲醇作為穩(wěn)定劑，因此對(duì)細(xì)胞固定有很大影響。
甲醇是一種滲透劑。它可以干擾膜結(jié)合蛋白的染色，并且可以極大地影響細(xì)胞骨架蛋白的染色。例如，當(dāng)染色細(xì)胞F-肌動(dòng)蛋白時(shí)，必須使用不含甲醇的甲醛固定劑。這是因?yàn)榧状伎梢栽诠潭ㄟ^(guò)程中破壞F-肌動(dòng)蛋白并阻止鬼筆環(huán)肽綴合物的結(jié)合。
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5.鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞滲透嗎？
鬼筆環(huán)肽不是細(xì)胞可滲透的，因此不能在活細(xì)胞上使用。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，例如Phalloidin-iFluor 488綴合物，只能在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)和無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中用于對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色。更多詳情
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6.鬼筆環(huán)肽-iFluor綴合物推薦
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貨號(hào)
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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規(guī)格
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價(jià)格
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 488標(biāo)記
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300Tests
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 514標(biāo)記
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300Tests
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1740
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 532標(biāo)記
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300Tests
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1740
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 555標(biāo)記
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300Tests
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1740
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23122
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 594標(biāo)記
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300Tests
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1740
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23125
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 633標(biāo)記
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300Tests
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1740
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 647標(biāo)記
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300Tests
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 680標(biāo)記
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300Tests
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 700標(biāo)記
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300Tests
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3540
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 750標(biāo)記
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300Tests
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鬼筆環(huán)肽-iFluor 790標(biāo)記
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300Tests
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鬼筆環(huán)肽-AF350標(biāo)記（升級(jí)版：鬼筆環(huán)肽-iFluor 350標(biāo)記)
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鬼筆環(huán)肽-AF488標(biāo)記（升級(jí)版：鬼筆環(huán)肽-iFluor 488標(biāo)記）
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鬼筆環(huán)肽-AF594標(biāo)記（升級(jí)版：鬼筆環(huán)肽-iFluor 594標(biāo)記）
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圖示：A）用鬼筆環(huán)肽-iFluor 488染色（#23115）染色的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，并使用配備FITC濾光片的熒光顯微鏡觀察。將細(xì)胞固定在4％甲醛中，并與線粒體染料MitoLite Red FX600（#22677）和Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；B）用鬼筆環(huán)肽-iFluor 514（#23116）染色的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，并使用配備有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察。固定的細(xì)胞用Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；C）用鬼筆環(huán)肽-iFluor 532（#23117）染色的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，并使用配有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察。固定的細(xì)胞用Nuclear Green DCS1（#17550）染色；D）用鬼筆環(huán)肽-iFluor 647（#23127）染色的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，并使用配備Cy5濾光片組的熒光顯微鏡觀察。首先用線粒體染料MitoLite Green（#22675）對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色。在4％甲醛中固定后，細(xì)胞用鬼筆環(huán)肽-iFluor 647標(biāo)記，并用Nuclear Blue DCS1（藍(lán)色，#17548）染色。
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