產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品中文名：Helixyte 綠色雙鏈DNA定量檢測試劑盒
產(chǎn)品英文名：Portelite? Fluorimetric DNA Quantitation Kit
產(chǎn)品貨號：17665
產(chǎn)品規(guī)格：100 Tests
產(chǎn)品概述
在進(jìn)行各種分析的DNA樣品制備中，DNA定量是一項(xiàng)非常重要的任務(wù)。 Portelite 熒光DNA定量試劑盒提供了使用Qubit熒光儀操作Helixyte Green BR快速定量dsDNA的方法。它針對Cytocite 和Qubit 熒光儀進(jìn)行了優(yōu)化。 Portelite 熒光DNA定量測定在三個(gè)數(shù)量級上呈線性。該測定法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度選擇性，并針對測量10 pg / μL至10 ng / μL的dsDNA濃度進(jìn)行了優(yōu)化。Helixyte Green-BR與dsDNA結(jié)合后表現(xiàn)出較大的熒光增強(qiáng)，并且比UV吸光度讀數(shù)高幾個(gè)數(shù)量級。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Helixyte 綠色雙鏈DNA定量檢測試劑盒。
適用儀器
|
量子位熒光計(jì)
|
|
|
Ex:
|
480 nm
|
|
Em：
|
530 nm
|
|
規(guī)格:
|
0.2 mL PCR 小瓶
|
|
CytoCite 熒光計(jì)
|
|
|
Ex:
|
480 nm
|
|
Em：
|
530 nm
|
|
規(guī)格:
|
0.2 mL PCR小瓶
|
實(shí)驗(yàn)方案
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡要概述
1. 準(zhǔn)備Helixyte Green BR工作溶液
2. 在每個(gè)0.2 mL PCR管中加入190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液
3. 在每個(gè)試管中添加10 uL DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液或測試樣品
4. 在室溫下孵育2分鐘
5. 使用CytoCite 熒光儀或Qubit 檢測熒光
注意：打開之前，請將所有成分置于室溫下。
溶液配制
工作溶液配制
Helixyte Green-BR工作溶液：在DNA分析緩沖液（組分B）中稀釋200倍Portelite dsDNA試劑（組分A）。 例如，要為8個(gè)樣品準(zhǔn)備足夠的工作溶液，請將5uL Helixyte Green BR（組分A）添加到1mL DNA分析緩沖液（組分B）中。注意：通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作液免受光照。 我們建議在塑料容器中操作而不是玻璃中制備該溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。 為了獲得好的結(jié)果，應(yīng)在準(zhǔn)備后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)使用此溶液。
實(shí)驗(yàn)步驟
根據(jù)DNA樣品的估計(jì)濃度，樣品量可以在1?20 uL的范圍內(nèi)。推薦的樣品量為10 uL，DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內(nèi)。如果使用其他樣品體積，請?jiān)跐舛扔?jì)算中調(diào)整稀釋倍數(shù)。
10 uL樣品體積（DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內(nèi)）實(shí)驗(yàn)方案。
1. 在每個(gè)Cytocite 樣品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中添加190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液。注意：請使用薄壁聚丙烯透明0.2 mL PCR管，例如＃CCT100。
2. 向每個(gè)試管中加入10 μL DNA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品，然后離心2?3秒進(jìn)行混合。
3. 將所有試管在室溫下孵育2分鐘。
4. 將樣品插入CytoCite 或Quibit 中，并通過綠色熒光通道檢測熒光。若使用CytoCite，請遵循適用于CytoCite 熒光儀的程序。
標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)備
對于Portelite 分析，您可以選擇使用DNA標(biāo)準(zhǔn)液繪制校正曲線。
1. 在DNA分析緩沖液（成分B）中，用100 ng/uL的DNA標(biāo)準(zhǔn)BR#2（成分D）進(jìn)行1/3系列稀釋，得到30、10、3、1、0.3、0.1和0 ng/uL的DNA標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。
2. 在每個(gè)試管中加入190 uL Helixyte Green BR工作溶液。
3. 將10 uL標(biāo)準(zhǔn)液或10 uL樣品添加到0.2 mL PCR管中。
4. 將反應(yīng)在室溫下孵育2分鐘。
5. 將樣品插入CytoCite ，并通過綠色熒光通道檢測熒光。
圖示
|
圖1.使用具有寬動(dòng)態(tài)范圍的Portelite 熒光DNA定量試劑盒生成的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。 使用綠色熒光通道定量熒光強(qiáng)度，使用線性擬合計(jì)算回歸模型。
|