Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒 綠色熒光
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貨號
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13500
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存儲條件
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f/l
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規(guī)格
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500 Tests
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價格
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Ex (nm)
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489
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Em (nm)
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515
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分子量
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溶劑
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品訂購：QQ:1485814040
聯(lián)系電話：18691576690
02968064558
簡要概述
蛋白酶測定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測。監(jiān)測各種蛋白酶活性已成為許多生物實驗室的常規(guī)任務(wù)。 一些蛋白酶已被確定為良好的**開發(fā)目標(biāo)。
我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測試劑盒是進(jìn)行常規(guī)檢測分離蛋白酶或鑒定蛋白質(zhì)樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯(lián)物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴(yán)重標(biāo)記，導(dǎo)致顯著的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應(yīng)，產(chǎn)生明亮的熒光染料標(biāo)記的短肽。熒光強(qiáng)度的增加與蛋白酶活性成正比。 該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號。
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產(chǎn)品說明書
方案一：一個96孔板的測定方案
以下說明書僅提供指南，實際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。
概述
準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液（50μL）
加入底物對照，陽性對照或測試樣品（50μL）
孵育0分鐘（用于動力學(xué)讀數(shù)）或30分鐘-1小時（用于終點讀數(shù)）
在Ex / Em = 490 / 525nm處監(jiān)測熒光強(qiáng)度
注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
操作方法
1.準(zhǔn)備工作解決方案：
1.1制備蛋白酶底物溶液：在2X測定緩沖液（組分C）中以1：100稀釋蛋白酶底物（組分A）。在96孔板中每次測定使用50μL蛋白酶底物溶液。
注意：2X分析緩沖液（組分C）設(shè)計用于檢測胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液配方。
1.2胰蛋白酶稀釋：在去離子水中以1:50稀釋胰蛋白酶（5U /μL，組分B），得到濃度為0.1U /μL。
2.根據(jù)說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養(yǎng)板中。
3.運(yùn)行酶促反應(yīng)：
3.1將50μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.1）加入到測定板中的所有孔中，充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測熒光增加。
對于動力學(xué)讀數(shù)：立即開始連續(xù)測量熒光強(qiáng)度，每5分鐘記錄數(shù)據(jù)30分鐘。
終點讀數(shù)：將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光，測量熒光強(qiáng)度。
方案二：使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑
概述
準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物對照，陽性對照，載體對照或測試樣品（90μL）
孵育0分鐘（用于動力學(xué)讀數(shù)）或30分鐘-1小時（用于終點讀數(shù)）
監(jiān)測Ex的熒光強(qiáng)度 / Em = 490 / 525nm
操作方法
1.準(zhǔn)備工作解決方案：
1.1制備1X測定緩沖液：將5mL去離子水加入5mL 2X測定緩沖液（組分C）中。
1.2制備蛋白酶底物溶液：在1X測定緩沖液（來自步驟1.1）中以1:20稀釋蛋白酶底物（組分A）。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。
注意：2X測定緩沖液（組分C）設(shè)計用于檢測胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。 對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液配方。
1.3蛋白酶稀釋：將蛋白酶在1X測定緩沖液中稀釋至濃度為500-1000nM。每個孔需要10μL蛋白酶稀釋液。為所有測試樣品準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)牧?，并為陽性對照和載體對照孔準(zhǔn)備額外的量。
2.根據(jù)說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養(yǎng)板中。
3.運(yùn)行酶促反應(yīng)：
3.1將10μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.2）加入陽性對照（PC），載體對照（VC）和測試樣品（TS）的孔中。 充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測熒光強(qiáng)度。
對于動力學(xué)讀數(shù)：立即開始連續(xù)測量熒光強(qiáng)度，每5分鐘記錄數(shù)據(jù)30分鐘。
終點讀數(shù)：將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光。 然后測量熒光強(qiáng)度。