細胞凋亡之所以成為人們研究的一個熱點，在很大程度上決定于細胞凋亡與臨床病毒的密切關(guān)系。這種關(guān)系不僅表現(xiàn)在凋亡及其機制的研究，闡明了一大類**病的發(fā)病機制，而且由此可以導致**新療法的出現(xiàn)。除了前兩期談到的細胞凋亡檢測方法及試劑外，今天百螢帶您來了解一下其他的檢測細胞凋亡的方法。
其他的細胞凋亡檢測
除了檢測線粒體膜電位的變化或半胱天冬酶活化之外的各種參數(shù)可用于監(jiān)測細胞凋亡。例如，據(jù)報道，通過直接GSH氧化或從細胞輸出GSH降低細胞谷胱甘肽（GSH）濃度是凋亡信號傳導中的初期。減少GSH是防御自由基和維持細胞內(nèi)細胞內(nèi)氧化還原水平的關(guān)鍵因素。GSH在胞質(zhì)溶膠中自由分布，并且在線粒體等細胞器中被分隔。線粒體GSH（mGSH）在修復和防御由氧化應(yīng)激和不斷產(chǎn)生的活性氧（ROS）引起的損傷中起重要作用。研究表明，mGSH的消耗將引發(fā)線粒體透化和效應(yīng)caspase活化的交替。為了測量還原GSH的濃度，AAT Bioquest開發(fā)了一種專有的非熒光Thiolite?Green染料，可用于Cell Meter?細胞內(nèi)GSH檢測試劑盒。在活的非凋亡細胞中，綠色熒光強度通過Thiolite?Green在靶細胞的胞質(zhì)溶膠和線粒體中的積累而增加。在凋亡細胞和死細胞中，Thiolite ?Green的熒光強度通過降低的GSH濃度而降低。用Thiolite?Green染色的細胞可以用流式細胞儀觀察，并且可以與其他凋亡測定結(jié)合用于多參數(shù)研究。通過Thiolite?Green在靶細胞的胞質(zhì)溶膠和線粒體中的積累，綠色熒光強度增加。在凋亡細胞和死細胞中，Thiolite?Green的熒光強度通過降低的GSH濃度而降低。用Thiolite?Green染色的細胞可以用流式細胞儀觀察，并且可以與其他凋亡測定結(jié)合用于多參數(shù)研究。（使用Cell Meter?細胞內(nèi)GSH檢測試劑盒對熒光強度變化的實例數(shù)據(jù)分析可在下面的圖1中找到）
圖1.在Jurkat細胞中添加喜樹堿后Thiolite?Green的熒光強度降低。Jurkat細胞進行處理過夜，不（藍線）或在37 20μM喜樹堿（粉紅色線）? ℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中，然后染料裝載Thiolite?綠色30分鐘。使用FL1通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀測量Thiolite?Green的熒光強度。
通過膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物檢測細胞凋亡的早期階段：
檢測細胞膜的形態(tài)變化是檢測活細胞凋亡過程早期階段的有效方法。通過檢測細胞溶質(zhì)磷脂，磷脂酰絲氨酸（PS）的表達，可以實現(xiàn)對這些變化的監(jiān)測，例如膜對稱性的喪失。在細胞凋亡的初始階段，細胞膜不穩(wěn)定，使PS從細胞的細胞質(zhì)側(cè)轉(zhuǎn)移到細胞膜的外部小葉，在那里它們可以通過膜聯(lián)蛋白檢測。膜聯(lián)蛋白是參與信號轉(zhuǎn)導的鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族，其優(yōu)先結(jié)合PS。AAT Bioquest公司開發(fā)了一系列與我們的iFluor?染料系列結(jié)合的**Annexin V蛋白。它們共同構(gòu)成PS傳感器，專門與PS結(jié)合，具有出色的光穩(wěn)定性。對于更靈敏的檢測或處理小樣本或有限樣本時，請使用百螢生物的Cell Meter?PS凋亡試劑盒，其中包含Apopxin PS傳感器。Apopxin對PS的高親和力比其他基于Annexin-V的商業(yè)試劑盒具有更強的分析能力。
下面的圖2是使用流式細胞儀檢測膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet?450與PS在Jurkat細胞凋亡中的結(jié)合活性的實例。在活的非凋亡細胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet?450檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。在凋亡細胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet?450與PS結(jié)合，PS位于細胞膜的外部小葉上，導致染色強度增加。
圖2.檢測膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet?450和磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞中的結(jié)合活性。Jurkat細胞無（藍色），或與在37 1個μM星形孢菌素（紅色）處理? C，5％CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5小時后，經(jīng)過染料加載用膜聯(lián)蛋白V-mFluor紫?450 30分鐘。使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet?450的熒光強度。
如需更多關(guān)于細胞凋亡的研究，請您咨詢百螢生物，您可以獲得關(guān)于細胞凋亡的全部資料，資料包括監(jiān)測DNA片段化和縮合，細胞壞死測定，自噬測定等，檢測細胞凋亡過程晚期的檢測方法。
涉及到的產(chǎn)品信息
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品牌
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貨號
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名稱
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AAT
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21508
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Thiolite? Green硫醇化合物綠色熒光探針
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AAT
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22810
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Cell Meter?細胞內(nèi)谷胱甘肽GSH檢測試劑盒
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AAT
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22831
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Cell Meter?磷脂酰絲氨酸細胞凋亡檢測試劑盒
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AAT
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20080
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Annexin V-mFluor? Violet 450標記
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