氯離子通道具有多種重要的生理和細(xì)胞功能，包括pH調(diào)節(jié)，體積穩(wěn)態(tài)，有機(jī)溶質(zhì)運(yùn)輸，細(xì)胞遷移，*******。選擇正確的試劑檢測，才能讓實(shí)驗(yàn)事半功倍。百螢為您推薦AAT Bioquest研發(fā)的Screen Quest氯化物檢測試劑盒。
許多慢性**狀態(tài)如囊性纖維化和Bartter綜合征是由于氯離子通道功能的缺陷。氯離子通道代表有價值的**靶標(biāo)。然而，用于篩選氯離子通道調(diào)節(jié)劑的現(xiàn)有技術(shù)是吞吐量，靈敏度和生理相關(guān)性之間的折衷。我們開發(fā)了一種強(qiáng)大的比色氯化物通道測定法，為研究氯離子通道提供了一種靈敏而方便的方法。該測定基于新的生色碘化物指示劑Iodide Blue TM，用于測量碘化物濃度。通過該測定可以檢測到低至30nM的碘化物。該測定比熒光氯指示劑（例如SPA，MQAE和光澤精等）更敏感，其僅能檢測氯離子濃度。與膜電位測定相比，這種新的氯離子通道測定更具選擇性?；贗odide Blue的氯離子通道測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動化。
通過使用這種新方法可以測定WSS-1和CFPAC1細(xì)胞中的向內(nèi)和向外電流活性。 非放射性，高靈敏度的特性使Screen Quest?比色氯化物測定成為HTS應(yīng)用的可靠方法。
Screen Quest?比色氯化物通道檢測試劑盒提供了一種篩選氯通道靶標(biāo)的優(yōu)化方法，具有以下優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)：
靈敏度高：可以檢測到低至30 nM的碘化物。
毒性*?。涸噭┍冉?jīng)典的Sandell和Kolthoff方法更**。
方便：配方具有*小的手動操作時間。
Screen Quest?比色氯化物通道分析
碘化物濃度的增加與308,405或630nm處的吸光度成比例
數(shù)據(jù)分析
圖1.使用Screen Quest?比色氯化物通道測定試劑盒測量96孔黑色板上的碘化物劑量響應(yīng)。 低至30 nM（10 pmol /孔）的碘化物可以在10分鐘的孵育時間內(nèi)檢測到（n = 3）
圖2.CFPAC-1細(xì)胞中的毛喉素劑量響應(yīng)以誘導(dǎo)CFTR氯離子通道內(nèi)向電流活性。 將CFPAC-1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中的生長培養(yǎng)基中以每100μl/孔40,000個細(xì)胞接種過夜。 將細(xì)胞用碘化物負(fù)載緩沖液中的毛喉素在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中處理5分鐘以達(dá)到*終指定的濃度。 用Screen QuestTM比色氯化物通道測定試劑盒測量細(xì)胞碘化物濃度。
圖3. WSS-1細(xì)胞中的GABADose響應(yīng)誘導(dǎo)GABAA通道內(nèi)向電流活動。 將WSS-1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中的生長培養(yǎng)基中以每100μl/孔40,000個細(xì)胞接種過夜。 將細(xì)胞用GABAA在碘化物上樣緩沖液中在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中處理5分鐘以達(dá)到*終指定的濃度。 用Screen QuestTM比色氯化物通道測定法測量細(xì)胞碘化物濃度。
圖4. WSS-1細(xì)胞中的GABADose響應(yīng)誘導(dǎo)GABAA通道向外流動活動。 將WSS-1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中的生長培養(yǎng)基中以每100μl/孔40,000個細(xì)胞接種過夜。 將細(xì)胞在碘化物上樣緩沖液中溫育4小時，然后在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中用GBSA在DPBS中處理5分鐘以達(dá)到*終指定的濃度。 用Screen QuestTM比色氯化物通道測定試劑盒測量細(xì)胞碘化物濃度。
圖5.GABAA通道抑制劑印防己**和荷包牡丹堿在GABA誘導(dǎo)的WSS-1細(xì)胞中對GABAA通道外向電流活性的影響。 將WSS-1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中的生長培養(yǎng)基中以每100μl/孔40,000個細(xì)胞接種過夜。將細(xì)胞在碘化物上樣緩沖液中孵育4小時，在*后30分鐘碘化物加載緩沖液孵育時間加入不同濃度的印防己**或荷包牡丹堿，通過在37℃下在DPBS中加入100μMGABA5分鐘激活GABAA通道，5％ CO2培養(yǎng)箱。 用Screen QuestTM比色氯化物通道測定試劑盒測量細(xì)胞碘化物濃度。
Screen Quest?比色氯化物通道分析試劑盒提供非放射性和優(yōu)化的穩(wěn)健方法，用于功能表征氯離子通道。 該測定可以檢測低至30nM的碘化物濃度，其比原子吸收光譜儀和熒光氯化物指示劑的靈敏度高> 100倍。 用這種新方法成功地測定了CFTR和GABAA氯離子通道的向內(nèi)和向外電流活性。
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