百螢教您選擇正確的ROS探針，正確的選擇讓實(shí)驗(yàn)不再迷茫。活性氧（ROS）是化學(xué)反應(yīng)性的含氧化學(xué)物質(zhì)，其作為細(xì)胞代謝的副產(chǎn)物而產(chǎn)生。 在動(dòng)物細(xì)胞中，ROS的產(chǎn)生通常發(fā)生在線粒體中。 在植物細(xì)胞中，ROS也可以在葉綠體中產(chǎn)生。 *近，已顯示ROS在過氧化物酶體和各種細(xì)胞類型的質(zhì)膜氧化酶中產(chǎn)生。
當(dāng)過量產(chǎn)生時(shí)，ROS一直被認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大分子如DNA，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的損傷。 從整體上講，這是由細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)表示的。 這種應(yīng)激狀態(tài)與細(xì)胞過程如細(xì)胞凋亡有關(guān)，而且在宏觀上更像是在許多人類**的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。
由于其具有破壞性的影響，細(xì)胞有幾個(gè)精心調(diào)節(jié)的系統(tǒng)來管理過量的ROS。 *充分研究的系統(tǒng)是谷胱甘肽 - 抗壞血酸循環(huán)，其使用NADH和NADPH作為電子供體將H2O2**為H2O。 其他系統(tǒng)包括酶，例如超氧化物歧化酶，其催化超氧陰離子（O 2- ）歧化成O 2或H 2 O 2，和過氧化氫酶，其催化H 2 O 2分解成H 2 O和O 2。
ROS對(duì)細(xì)胞的利與弊導(dǎo)致它們?cè)缫驯粡V泛的研究了，但是*近研究已經(jīng)研究了ROS在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的作用。 在控制量方面，ROS已被證明可調(diào)節(jié)基因活化。 然而，出現(xiàn)這種情況的具體機(jī)制仍有爭議。ROS可能與特殊受體結(jié)合，這些受體啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致基因調(diào)控。 ROS也可能通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)磷酸化直接修飾這種信號(hào)級(jí)聯(lián)中的蛋白質(zhì)。
既然ROS對(duì)細(xì)胞作用如此之大且類型繁多，那么如何才能正確的選擇探針對(duì)ROS進(jìn)行檢測(cè)呢？
|
檢測(cè)目標(biāo)
|
作用目標(biāo)
|
探針
|
貨號(hào)
|
原理
|
|
|
過氧化氫（H2O2）
許多酶促ROS**途徑的產(chǎn)物。 *充分研究的是超氧化物歧化酶活性，其催化超氧陰離子還原為過氧化氫。
|
活細(xì)胞
|
DCFH-DA
|
15204
|
探針進(jìn)入細(xì)胞，其中酯酶裂解雙乙酸酯基團(tuán)。 然后DCFH被過氧化氫氧化成DCF并在激發(fā)時(shí)發(fā)出綠色熒光。
|
|
|
二氫羅丹明123
|
15206/15207
|
探針被動(dòng)地滲透細(xì)胞膜。 通過過氧化氫氧化產(chǎn)生羅丹明123，其在激發(fā)時(shí)發(fā)出藍(lán)色熒光。
|
|
|
OxiVision? Blue
|
11504/11505
|
探針滲透細(xì)胞并被細(xì)胞內(nèi)過氧化氫氧化，激發(fā)時(shí)產(chǎn)生熒光
|
|
|
OxiVision? Green
|
11503/11506
|
|
|
細(xì)胞提取物
|
Amplite?熒光過氧化氫檢測(cè)試劑盒（紅色）
|
11501
|
過氧化氫依賴氧化ADHP（同義詞：10-乙酰基-3,7-二羥基吩惡嗪，Amplex®Red）通過辣根過氧化物酶（HRP）將ADHP轉(zhuǎn)化為試鹵靈。 可以使用比色法或熒光法檢測(cè)試鹵靈。
|
|
|
Amplite?比色過氧化氫檢測(cè)試劑盒
|
11500
|
|
|
Amplex?紅色過氧化氫/過氧化物酶檢測(cè)試劑盒
|
/
|
辣根過氧化物酶（HRP）對(duì)過氧化氫IR的過氧化氫依賴性氧化產(chǎn)生活化的探針。 激發(fā)會(huì)發(fā)出近紅外熒光信號(hào)
|
|
|
Amplite?熒光過氧化氫檢測(cè)試劑盒（紅外光）
|
11502
|
|
|
檢測(cè)目標(biāo)
|
作用目標(biāo)
|
探針
|
貨號(hào)
|
原理
|
|
超氧陰離子（O2-）
有氧代謝的副產(chǎn)物，如線粒體呼吸（特別是復(fù)合物I和復(fù)合物III）
|
活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
|
lucigenin（光澤精）
|
21259
|
通過轉(zhuǎn)化為光澤精陽離子基團(tuán)激活光澤精。 光澤精陽離子自由基與超氧陰離子反應(yīng)生成二氧雜環(huán)丁烷中間體，其分解為N-甲基吖啶酮。 N-甲基吖啶酮中的高能電子降低能量狀態(tài)，導(dǎo)致發(fā)光。
|
|
Coelenterazine（腔腸素）
|
21150
|
超氧陰離子的氧化導(dǎo)致激發(fā)的電子態(tài)。 在衰變到基態(tài)電子配置時(shí)，光子作為發(fā)光釋放。
|
|
Luminol（魯米諾）
|
11050
|
超氧化物依賴性酶催化魯米諾的氧化導(dǎo)致發(fā)光。
|
|
Hydroethidine（二氫乙錠）
|
15200
|
探針被動(dòng)地滲透完整細(xì)胞并定位于線粒體中。 通過超氧化物氧化激活探針。 活化的探針與DNA嵌入，并在激發(fā)后發(fā)熒光。 DNA結(jié)合是強(qiáng)熒光信號(hào)所必需的。 對(duì)于氫化乙啶，活化的探針是乙錠（即與DNA染色溴化乙錠相同的活性物質(zhì)）
|
|
MitoSox? Red
|
/
|
|
MitoROS? 580
|
16052/22970/22971
|
|
MitoROS? 520
|
16060
|
探針容易通過完整的細(xì)胞膜，然后定位在線粒體中。 然后通過超氧化物氧化。 激發(fā)后，它會(huì)釋放出綠色熒光
|
|
檢測(cè)目標(biāo)
|
作用目標(biāo)
|
探針
|
貨號(hào)
|
原理
|
|
羥基（?OH）
當(dāng)超氧陰離子與過渡金屬反應(yīng)時(shí)可以產(chǎn)生。 極度反應(yīng)。 可以與DNA骨架上的氫反應(yīng)，導(dǎo)致鏈斷裂。
|
活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
|
MitoROS? OH580
|
16055
|
探針能夠自由地進(jìn)入活細(xì)胞，其中活細(xì)胞被游離羥基特異性氧化。 激發(fā)后，氧化的探針發(fā)出紅色熒光。
|
|
總ROS
包括過氧化氫，超氧陰離子，羥基自由基，單線態(tài)氧，一氧化氮，過氧化丁基和次氯酸
|
活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
|
ROS? Brite 570
|
16000/22902
|
探針被動(dòng)地滲透完整的細(xì)胞膜。 一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，探針就被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化。 探針也可以在溶液中被ROS氧化，用于細(xì)胞提取物測(cè)定。 激發(fā)后，探針發(fā)出熒光信號(hào)。
|
|
ROS? Brite 670
|
16002/22901
|
|
ROS? Brite 700
|
16004/22903
|
|
Amplite? ROS Green
|
22900
|
百螢生物（Biolite），是 AAT Bioquest 中國區(qū)域上等代理商，為國內(nèi)提供 AAT 的原裝產(chǎn)品及產(chǎn)品定制、技術(shù)服務(wù)，歡迎咨詢、訂購！