基本信息
貨號(hào)：22022 (25 mg) 22028 (5 x 0.5 mg)
儲(chǔ)存方式：-20℃避光
保質(zhì)期：自收到起12個(gè)月
簡(jiǎn)介
眾所周知，細(xì)胞的熒光標(biāo)記是檢測(cè)樣品中存活細(xì)胞的有效方法。流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光染色是分析異質(zhì)細(xì)胞群的有力工具。在所有現(xiàn)有的熒光染料中，熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（例如CFSE）是非熒光分子，其擴(kuò)散到細(xì)胞中并被細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光產(chǎn)物。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細(xì)胞膜和活性酯酶活性的細(xì)胞中產(chǎn)生和積累，而死細(xì)胞不被染色。 FDA及其類似物（如CFSE）的膜轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)水解的**動(dòng)力學(xué)與細(xì)胞功能有關(guān)。對(duì)于多重轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞或使用FITC標(biāo)記的抗體，我們提供功能類似于CFSE的CytoTell?染料，可用于使用GFP或FITC標(biāo)記抗體的多色應(yīng)用，因?yàn)檫@些染料具有激發(fā)或發(fā)射光譜不同于CFSE及其熒光素類似物。此外，我們的CytoTell?染料不僅消除了與CFSE相關(guān)的染料外排缺陷，而且在成像或流式細(xì)胞分析之前與染色細(xì)胞中的細(xì)胞培養(yǎng)基相容。
儲(chǔ)存和處理?xiàng)l件
如果儲(chǔ)存在-20°C，CFSE應(yīng)保持穩(wěn)定至少12個(gè)月，避免光照和潮濕，避免凍/融循環(huán)。
物理化學(xué)特性
分子量：557.46
溶劑：二甲基亞砜（DMSO）
光譜性質(zhì)：Ex / Em = 494 / 521nm
分析方案
簡(jiǎn)要總結(jié)
使用測(cè)試化合物制備細(xì)胞®
添加0.5至5μMCFSE工作溶液®
在室溫或37 oC下將染料與細(xì)胞一起孵育10至30分鐘®
移除染料工作溶液®
使用Ex / Em = 490/520 nm的流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析 （FL1）
注意：以下是我們推薦的活細(xì)胞方案。 它只提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。
1.準(zhǔn)備10 mM DMSO儲(chǔ)備溶液
對(duì)于＃22022：將5.6mg溶于1ml DMSO中以制備10mM儲(chǔ)備溶液（1mg / ml相當(dāng)于1.8mM）;對(duì)于＃22028，向每個(gè)小瓶中加入90μLDMSO以制備10mM儲(chǔ)備溶液。
注意：應(yīng)及時(shí)使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并在<-20℃冷凍。 避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。
2.準(zhǔn)備CFSE工作解決方案
在使用前準(zhǔn)備CFSE工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7）稀釋步驟1中的DMSO儲(chǔ)備液（20,000至2,000次），并將它們混合。
3.用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞：
3.1用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間。
3.2離心細(xì)胞，每管取1-5×105個(gè)細(xì)胞。
3.3將細(xì)胞重懸于500μL染料工作溶液中（來自步驟2）。
3.4在室溫或37°C下用染料溶液孵育細(xì)胞10到30分鐘，避光。
3.5從細(xì)胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500μL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管加入1-5×105個(gè)細(xì)胞。
3.6使用流式細(xì)胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光變化。