基本信息
貨號(hào)：22656 (500 assays)
儲(chǔ)存條件：保存在冰箱并避光
適用儀器：熒光顯微鏡
簡介
溶酶體是細(xì)胞器，其含有酸水解酶以分解廢物和細(xì)胞碎片。 溶酶體消化多余的或破舊的細(xì)胞器，食物顆粒和吞噬的病毒或**。溶酶體周圍的膜允許消化酶在pH4.5下工作。 溶酶體的內(nèi)部是與微堿性胞質(zhì)溶膠（pH 7.2）相比，酸性（pH 4.5-4.8）。 溶酶體通過質(zhì)子泵和氯離子通道從細(xì)胞質(zhì)中泵送質(zhì)子穿過膜來維持這種pH差異。
我們的Cell Navigator?熒光成像試劑盒是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記亞細(xì)胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細(xì)胞核等?；罴?xì)胞區(qū)的選擇性標(biāo)記為研究空間和時(shí)間細(xì)胞事件提供了一種強(qiáng)大的方法。
該特定試劑盒設(shè)計(jì)用于在Ex / Em = 490 / 525nm處以綠色熒光標(biāo)記活細(xì)胞的溶酶體。試劑盒中使用的專有溶解性染料可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑是一種疏水性化合物，易于滲透完整的活細(xì)胞，并在進(jìn)入細(xì)胞后被捕獲在溶酶體中。進(jìn)入溶酶體后，其熒光顯著增強(qiáng)。這一關(guān)鍵特征顯著降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞活力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。
試劑盒成分
樣品分析
簡要總結(jié)
準(zhǔn)備細(xì)胞®
添加染料工作溶液®
在37°C孵育30分鐘至2小時(shí)®
在熒光顯微鏡下在Ex / Em = 490/525 nm（FITC濾光片組）下進(jìn)行分析
操作步驟
1.準(zhǔn)備溶酶體染色溶液：
1.1將LysoBrite?綠色（組分A）溫?zé)嶂潦覝亍?/span>
1.2通過將20μLLysoBrite?Green（組分A）稀釋到10 mL活細(xì)胞染色緩沖液（組分B）中來制備染料工作溶液。
注1：對(duì)于一個(gè)96孔板，20μL的LysoBrite?Green（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite?Green（組分A）等分并儲(chǔ)存在<-20 oC。 避光，避免反復(fù)凍融循環(huán)。
注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化。 可以根據(jù)特定細(xì)胞類型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來修改染色條件。
2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞：
2.1對(duì)于貼壁細(xì)胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時(shí)，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 將細(xì)胞在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。 使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
注意：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。
2.2對(duì)于懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞以1000rpm離心5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。 在預(yù)熱的生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。 使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
注1：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。
注2：懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細(xì)胞染色（見步驟2.1）。
圖1.使用Cell Navigator?溶酶體染色試劑盒染色的U2OS細(xì)胞圖像* Costar黑色96孔板中的綠色熒光*
參考文獻(xiàn)
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