基本信息
貨號：22661
儲存條件：冰箱，避光
適用儀器：熒光顯微鏡
簡介
肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細(xì)胞中。 它也是高度保守的蛋白質(zhì)之一，在藻類和人類等多種物種中的差異不超過20％。 肌動蛋白是細(xì)胞中兩種細(xì)絲的單體亞基：細(xì)絲，細(xì)胞骨架的三個主要成分之一，以及細(xì)絲，是肌細(xì)胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細(xì)胞過程，包括肌肉收縮，細(xì)胞運動，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細(xì)胞器運動，細(xì)胞信號傳導(dǎo)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的建立和維持。
我們的Cell Navigator?熒光成像試劑盒是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記亞細(xì)胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細(xì)胞核等?；罴?xì)胞區(qū)的選擇性標(biāo)記為研究空間和時間細(xì)胞事件提供了一種強大的方法。
該特定試劑盒設(shè)計用于標(biāo)記具有綠色熒光的固定細(xì)胞中的F-肌動蛋白。 該試劑盒使用綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物，其選擇性結(jié)合F-肌動蛋白。 該綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物是F-肌動蛋白的高親和力探針。 當(dāng)以納摩爾濃度使用時，phallotoxins是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞實驗。 該試劑盒為所有必需組件提供優(yōu)化的染色方案，該方案功能強大，只需極少的手動操作時間。 它是保存特定細(xì)胞熒光圖像的**工具。 鬼筆環(huán)肽綴合物具有與FITC類似的光譜性質(zhì)（Ex / Em = 500 / 520nm）。 它也可以用于使用FITC濾光片（Ex / Em = 490 / 525nm）的熒光顯微鏡演示。
試劑盒組成
分析方案
簡要總結(jié)
準(zhǔn)備樣品（微孔板孔）®
從板中取出液體®
添加100μL/孔的iFluor?488-鬼筆環(huán)肽溶液®
在室溫下染色細(xì)胞15到60分鐘®
洗滌細(xì)胞®
在顯微鏡下檢查樣品Ex / Em = 488 / 520nm
注意：打開前將所有組件加熱至室溫
詳細(xì)步驟
1.準(zhǔn)備1X iFluor?488-鬼筆環(huán)肽工作溶液：
將10μL的iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽（組分A）加入10mL標(biāo)記緩沖液（組分B）中。
注1：未使用的1X iFluor?488-鬼筆環(huán)肽原液應(yīng)等分并保存在-20oC。避光保存。
注2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。 應(yīng)相應(yīng)地制備iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度。
2.染色細(xì)胞：
2.1進行甲醛固定。 在室溫下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育細(xì)胞10-30分鐘。
注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS沖洗固定的細(xì)胞2-3次。
2.3可選：將0.1％Triton X-100在PBS中加入固定細(xì)胞（來自步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。
2.4將100μL/孔（96孔板）的iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽工作溶液（來自步驟1）加入固定的細(xì)胞（來自步驟2.2或2.3），并在室溫下將細(xì)胞染色15至60分鐘。
2.5用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以去除多余的染料，然后使用FITC通道進行板密封和成像。
圖1.用4％甲醛固定的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，然后在Costar黑色96孔板中用Cell Navigator TM FActin標(biāo)記試劑盒*綠色熒光*染色。 細(xì)胞分別用iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽（Cat＃22261，Green）和細(xì)胞核染色DAPI（Cat＃17507，藍(lán)色）標(biāo)記。 在固定之前，用ER Red TM（Cat＃22636，Red）染色細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。
參考文獻(xiàn)
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