上期百螢生物帶您了解了四種市場(chǎng)常見(jiàn)的熒光探針，本期我們將給您介紹其他幾種市場(chǎng)常見(jiàn)的DNA探針，希望對(duì)您的實(shí)驗(yàn)有所幫助。
DAPI（4'，6-二脒基-2-苯基吲哚）（Key：藍(lán)色熒光、AT序列偏好、熒光顯微鏡、微滲透、細(xì)胞毒性、無(wú)毒）
DAPI，與此列表中的許多染料一樣，*初合成為醫(yī)學(xué)劑。它*初用于**錐蟲(chóng)病，這是一種由寄生蟲(chóng)引起的**。在20世紀(jì)70年代后期，DAPI被用作DNA探針，因?yàn)樗哂薪Y(jié)合DNA的功效和結(jié)合后熒光的大量增加。DAPI特別強(qiáng)烈地結(jié)合雙鏈DNA的富含AT的區(qū)域，并且在結(jié)合時(shí)將經(jīng)歷大約20倍的熒光增加。它也可以與RNA結(jié)合，但熒光增加較弱，發(fā)射紅移。DAPI通常用于熒光顯微鏡。它特別成功地染色死細(xì)胞或具有受損膜的細(xì)胞。DAPI可以通過(guò)完整的細(xì)胞膜，但是比較困難。因此，不推薦用于活細(xì)胞染色。DAPI的激發(fā)波長(zhǎng)為358nm，發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。這意味著當(dāng)使用藍(lán)色/青色濾鏡進(jìn)行可視化時(shí)，它將顯示為藍(lán)色。它也可以與綠色熒光探針如GFP一起使用。
在實(shí)驗(yàn)中，DAPI具有高細(xì)胞毒性，這是不可使用DAPI進(jìn)行活細(xì)胞染色的另一原因。DAPI對(duì)人類是無(wú)毒的。然而，與許多DNA探針一樣，DAPI可能具有一些誘變特性。該試劑百螢生物有售，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17509。
7-AAD（7-氨基放線菌素D）（Key:GC序列偏好、紅色熒光、543nm氦 - 氖激光、死細(xì)胞、不可滲透、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)）
7-AAD是熒光探針和嵌入劑。與DAPI一樣，它對(duì)結(jié)合雙鏈DNA具有很強(qiáng)的親和力。與富含AT的區(qū)域結(jié)合的DAPI不同，7-AAD選擇性地結(jié)合富含GC的區(qū)域。它也會(huì)與RNA結(jié)合，因此在染色前可能需要消化酶。7-AAD的激發(fā)波長(zhǎng)為546nm，發(fā)射波長(zhǎng)為647nm。由于斯托克斯大轉(zhuǎn)變，許多研究人員使用7-AAD與藍(lán)色和綠色熒光探針結(jié)合進(jìn)行多色分析。7-AAD受到543 nm氦氖激光器的激發(fā)。
7-AAD適用于檢測(cè)死細(xì)胞群或具有受損膜的細(xì)胞。它不容易通過(guò)完整的膜，是它不能成為活細(xì)胞染料的重要原因。7-AAD已在熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)中得到廣泛應(yīng)用。該試劑百螢生物有售，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17501。
Hoechst 33258（33342,34580）（Key:藍(lán)色熒光、活細(xì)胞、膜可滲透、低細(xì)胞毒性、AT序列偏好、氙汞燈、紫外激光、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀）
Hoechst染色是一組藍(lán)色熒光DNA探針。早在20世紀(jì)70年代，它們就被用于染色DNA。這些染料由德國(guó)公司Hoechst AG開(kāi)發(fā)，是傳統(tǒng)藍(lán)色熒光染料的良好替代品。Hoechst染料比類似染料如DAPI具有更高的細(xì)胞滲透性。這意味著Hoechst染色劑，如Hoechst 33258，適用于染色活細(xì)胞和死細(xì)胞。此外，由于Hoechst染料的細(xì)胞毒性較低，對(duì)活細(xì)胞群的影響大大降低。Hoechst染色將選擇性地結(jié)合富含AT的雙鏈DNA區(qū)域，特別是與小溝結(jié)合。在與DNA結(jié)合后，Hoechst染色將經(jīng)歷大約30倍的熒光增加。Hoechst染色可以被紫外線（~360nm）激發(fā)并發(fā)出藍(lán)色熒光（~460nm）。這些染料與氙汞燈以及紫外激光器兼容。它們非常適用于熒光顯微鏡，**組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。
Hoechst 33258,33342和34580之間的區(qū)別很重要。與Hoechst 33258相比，Hoechst 33342由于添加了親脂性乙基而具有顯著更高的滲透性。對(duì)于Hoechst 34580，發(fā)射*大值略微藍(lán)移，與Hoechst 33258和Hoechst 33342的461 nm發(fā)射*大值相比，駐留在437 nm處。該試劑百螢生物有售，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17523。
PicoGreen®/ Helixyte?（Key:高成本，極其敏感，綠色熒光，PCR，酶標(biāo)儀，dsDNA）
PicoGreen（及其化學(xué)等效的Helixyte）是一種極其敏感的雙鏈DNA探針。它可用于生物化學(xué)應(yīng)用，例如酶標(biāo)儀中dsDNA的定量。它可以檢測(cè)低至25 ng / mL的dsDNA。這使得它比Hoechst探針更敏感。除了靈敏度之外，PicoGreen還是一種非常有選擇性的探針。它對(duì)單鏈DNA，RNA和游離核苷酸的dsDNA具有高親和力。
顧名思義，PicoGreen在與DNA結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)出綠色熒光。它的熒光也會(huì)增加大約1000倍。這意味著它將具有非常好的信噪比。它可用于各種應(yīng)用，例如PCR和微陣列分析。它是DAPI和Hoechst的良好替代品。特別是，當(dāng)DNA樣品數(shù)量有限時(shí)，由于其對(duì)傳統(tǒng)污漬的敏感性和選擇性更高，因此非常適用。然而，這些優(yōu)勢(shì)是有代價(jià)的。探針本身比傳統(tǒng)探針更昂貴，每毫升花費(fèi)幾百美元。該試劑百螢生物有售，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17597。
YOYO®-1 / DiYO?-1 /TOTO®-1 / DiTO?-1（Key:極其敏感、高成本、不滲透、流式細(xì)胞儀、細(xì)胞活力、花菁、綠色熒光）
這些是基于化合物惡唑黃的菁染料家族。盡管如此，這些染料實(shí)際上發(fā)出的是綠色熒光而不是黃色熒光。例如，YOYO-1（及其化學(xué)當(dāng)量，DiYO-1）的*大發(fā)射為509nm。TOTO-1（及其化學(xué)當(dāng)量，DiTO-1）也是如此; 該化合物的*大發(fā)射為535nm。這些化合物是嵌入劑，意味著它們將自身插入DNA堿基對(duì)的平面表面之間。該DNA探針家族因其對(duì)DNA的高親和力而被人們所知曉。在與DNA結(jié)合后，這些探針可以經(jīng)歷熒光增加一千至三千倍。這種對(duì)DNA的強(qiáng)烈親和力使它們非常適合需要極高靈敏度的實(shí)驗(yàn)。然而，這些探針相當(dāng)昂貴。一毫升可能花費(fèi)幾千美元。
因?yàn)檫@些探針是細(xì)胞不可滲透的，所以它們不能通過(guò)完整的細(xì)胞膜。它們非常適合染色固定或死細(xì)胞。在這方面，這些探針通常與諸如流式細(xì)胞術(shù)的平臺(tái)一起用于細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性測(cè)定。該試劑百螢生物有售，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17580。
SYBR®（Key:綠色熒光，qPCR，凝膠電泳，高成本，花青）
SYBR是另一類基于花青的染料，用于染色DNA和RNA。該染料家族對(duì)雙鏈DNA具有高選擇性，對(duì)單鏈DNA和RNA的選擇性較低。SYBR染料主要是綠色熒光探針（SYBR Green I和SYBR Green II），也可選擇黃色熒光（SYBR Gold）。
SYBR染料已被發(fā)現(xiàn)用于量化DNA。例如，SYBR染料可用于監(jiān)測(cè)定量實(shí)時(shí)PRC（qPCR）。SYBR染料也已用于凝膠電泳。特別是，SYBR染料作為常用的溴化乙錠的更**的替代品已被出售。然而，關(guān)于SYBR染料是否確實(shí)比溴化乙錠更不危險(xiǎn)的證據(jù)是混合的，因?yàn)樗鼈兌际菨撛诘恼T變劑，源于它們插入DNA的能力。在定價(jià)方面，SYBR染料比溴化乙錠貴得多，每毫升約500美元。該試劑百螢生物有它的同等替代品，見(jiàn)貨號(hào)Cat#17592。
百螢生物，是美國(guó)AAT Bioquest 的中國(guó)代理商，原裝進(jìn)口的產(chǎn)品，給您*佳的科研體驗(yàn)。以上是本期介紹的所有DNA探針，希望大家根據(jù)自己的實(shí)際情況選擇適合自己試驗(yàn)的試劑，達(dá)到上乘的實(shí)驗(yàn)效果。