熒光染料的附著物的作用是有幫助熒光染料展色、提高熒光染料和下游樹酯的相溶性、保護熒光染料的性能。通常載體樹脂是強極性樹脂,一方面有助色作用,增大熒光效率;另一方面與熒光染料有很好的相溶性。
熒光染料的結(jié)構(gòu)特征:
1.分子內(nèi)含有發(fā)射熒光的基團,如羰基、氮氮雙鍵、碳氮雙鍵等。
2.分子內(nèi)含有助色基團。助色基團使光譜紅移并增大熒光效率,如伯胺基、仲胺基、羥基、醚鍵、酰胺基 等。
3.分子內(nèi)含有剛性平面結(jié)構(gòu)的共軛π鍵。分子內(nèi)共軛體系愈大平面性愈強其熒光強度愈高。
熒光染料是指某一波長的光波后發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì),多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。
常用熒光染料具體介紹如下:
(一)**熒光標記常用的熒光染料
FITC(異硫氰酸熒光素):綠色530nm
PE(藻紅蛋白):橙黃色575nm
488nm波長的氬離子激光激發(fā)
APC(別藻青蛋白):紅色660nm
630nm波長的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā)
PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):深紅色675nm
PI(碘化丙啶):橙紅色620nm
(二)細胞自發(fā)熒光
自發(fā)熒光信號為噪聲信號,在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在**細胞化學等測量中,對于結(jié)合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關(guān)鍵。
(三)**熒光標記
常用的標記染色為直接**熒光染色和間接**熒光染色。在進行雙參數(shù)或多參數(shù)分析時,常常需要進行熒光抗體的組合標記,目前已經(jīng)有雙色、三色以及四色標記。